Un kit de détection des mycoplasmes permet aux laboratoires d'identifier une contamination susceptible d'affecter les expériences sur cultures cellulaires, même en l'absence de signes visibles. Un dépistage régulier contribue au contrôle qualité des cultures et à une meilleure interprétation des résultats expérimentaux.
MycoDiag® d'AnyGenes® utilise la qPCR en temps réel ou la PCR en point final pour détecter l'ADN des mycoplasmes directement dans les surnageants de culture cellulaire. Le test cible 25 organismes associés à la contamination des cultures et peut être intégré aux procédures de contrôle de routine des laboratoires.
Les mycoplasmes sont de petites bactéries dépourvues de paroi cellulaire qui peuvent contaminer les cultures sans provoquer de signes visibles évidents. Une contamination non détectée peut modifier le comportement des cellules et compromettre l'interprétation des résultats expérimentaux.
La contamination par les mycoplasmes peut affecter la prolifération cellulaire, le métabolisme et la morphologie des cellules, modifiant ainsi certaines de leurs caractéristiques biologiques.
La présence de mycoplasmes peut modifier l'expression des gènes, les voies de signalisation cellulaire et les réponses inflammatoires. Ces changements biologiques peuvent introduire des biais dans les études de qPCR, de RNA-seq et de biomarqueurs, et compliquer l'interprétation des résultats.
Une contamination par les mycoplasmes peut réduire l'efficacité des transfections, modifier les phénotypes cellulaires et introduire une variabilité biologique susceptible d'affecter la reproductibilité des expériences.
Pourquoi effectuer un dépistage régulier ? La contamination par les mycoplasmes peut passer inaperçue lors de l'observation des cultures. Un dépistage régulier aide les laboratoires à identifier les cultures contaminées et à réduire le risque de conclusions expérimentales erronées.
Les méthodes PCR permettent de détecter l'ADN des mycoplasmes dans les échantillons de culture cellulaire. Le kit de détection des mycoplasmes MycoDiag® d'AnyGenes® utilise une amplification ciblée de l'ADN pour rechercher les organismes couverts par le test directement dans les surnageants de culture cellulaire.
Les surnageants de culture cellulaire sont analysés selon le protocole MycoDiag® adapté, afin de rechercher l'ADN des mycoplasmes sans dépendre de signes visibles de contamination.
Des séquences d'ADN ciblées sont amplifiées au moyen de tests PCR compatibles. La qPCR en temps réel permet de suivre l'amplification pendant la réaction, tandis que les produits de PCR en point final peuvent être visualisés par électrophorèse sur gel d'agarose.
Les contrôles positif et négatif contribuent à vérifier le fonctionnement du test et à surveiller une éventuelle contamination des réactions. Un contrôle interne aide à identifier une inhibition de la PCR susceptible de compromettre l'interprétation des résultats négatifs.
Découvrez les principales caractéristiques techniques de MycoDiag® pour choisir la méthode de détection, le format du kit et la configuration compatibles avec les besoins de votre laboratoire.
Composition du kit : MycoDiag® comprend des jeux d'amorces ciblées, des réactifs d'amplification et des contrôles analytiques, selon la référence catalogue choisie. Consultez le guide utilisateur pour connaître la composition détaillée et les quantités fournies.
qPCR en temps réel ou PCR en point final pour la détection ciblée de l'ADN des mycoplasmes.
Surnageants de culture cellulaire, analysés conformément au protocole MycoDiag®.
Résultats en moins de 2 heures dans les conditions expérimentales spécifiées, selon l'instrument de PCR ou de qPCR utilisé.
Ciblage de 25 organismes associés à la contamination des cultures cellulaires, comprenant des espèces du genre Mycoplasma et des organismes apparentés.
Les contrôles positif, négatif et interne contribuent à vérifier le fonctionnement du test, à surveiller une éventuelle contamination des réactions et à identifier une inhibition de la PCR.
Différentes configurations sont proposées pour les instruments de qPCR en temps réel compatibles et les protocoles de PCR en point final. La référence appropriée doit être sélectionnée à l'aide du guide de compatibilité.
Le dépistage des mycoplasmes doit être intégré aux procédures de contrôle qualité des cultures cellulaires, avec des analyses complémentaires aux étapes importantes du travail expérimental. La fréquence des tests dépend des lignées cellulaires, des pratiques du laboratoire et du risque de contamination.
Contrôler les cultures avant les expériences pour lesquelles une contamination non détectée pourrait compromettre l'interprétation des résultats, notamment :
Effectuer un dépistage aux étapes importantes de la gestion des lignées cellulaires, notamment :
Les nouvelles lignées doivent être contrôlées avant leur introduction dans les espaces de culture non contaminés.
Réaliser des tests périodiques conformément aux procédures de contrôle qualité du laboratoire. Un dépistage supplémentaire peut être envisagé lorsque :
Fréquence du dépistage : Il est recommandé de définir un calendrier de contrôle documenté, adapté au risque de contamination, aux pratiques de culture cellulaire et aux besoins expérimentaux du laboratoire. Le dépistage régulier ne doit pas être limité aux cultures présentant des anomalies visibles.
MycoDiag® permet de détecter l'ADN de 25 organismes associés à la contamination des cultures cellulaires. Ses protocoles de qPCR et de PCR en point final intègrent des contrôles analytiques pour vérifier le fonctionnement du test et faciliter l'interprétation des résultats.
Portée de la détection : MycoDiag® cible les 25 organismes répertoriés ci-dessus. Un résultat négatif ne permet pas d'exclure la présence d'organismes qui ne sont pas couverts par le test.
MycoDiag® comprend des contrôles positif, négatif et interne pour vérifier l'amplification, surveiller une éventuelle contamination des réactions et identifier une inhibition de la PCR.
Un contrôle contenant de l'ADN de mycoplasme (Myco POS) permet de vérifier que le test produit le signal d'amplification attendu.
Un contrôle sans matrice d'ADN permet de surveiller une éventuelle contamination introduite lors de la préparation des réactions de PCR ou de qPCR.
Une réaction de contrôle distincte aide à identifier une inhibition de la PCR susceptible de compromettre l'interprétation des résultats négatifs.
Les résultats obtenus avec MycoDiag® peuvent être examinés à partir des courbes d'amplification en temps réel ou par électrophorèse sur gel d'agarose. Leur interprétation doit tenir compte des contrôles analytiques du test.
Interprétation des résultats : Les résultats négatifs doivent être évalués en tenant compte de la validité des contrôles analytiques. Pour la PCR en point final, le guide utilisateur MycoDiag® indique des produits de 129 à 142 pb pour le contrôle positif et de 92 pb pour le contrôle interne.
Consultez le guide utilisateur MycoDiag® pour connaître le protocole complet, les résultats attendus des contrôles et les critères d'interprétation.
Utilisation prévue : Réservé à la recherche en biologie moléculaire. Non destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.
MycoDiag® est disponible en trois formats pour répondre aux différents besoins des laboratoires. Choisissez le nombre de réactions et la configuration adaptée à votre instrument de PCR ou de qPCR.
| Référence Catalogue | Nombre de Réactions | Prix (HT) |
|---|---|---|
X : réactifs de type W, R, LR, F, selon l’instrument de qPCR ou P pour PCR en point final (cf. Fichier de compatibilité)
Dans les références catalogue, la lettre X correspond à la configuration du test : W, R, LR ou F selon l'instrument de qPCR en temps réel compatible, ou P pour une utilisation en PCR en point final.
Consultez les informations de compatibilité et le protocole MycoDiag® avant de sélectionner votre référence.
Découvrez le retour d'expérience d'un laboratoire utilisant MycoDiag® pour le dépistage régulier des mycoplasmes dans les cultures cellulaires.
Hôpital Bicêtre
AP-HP, Paris-Saclay
« Notre laboratoire utilise le réactif MycoDiag depuis plus d'un an pour surveiller la contamination par les mycoplasmes. Nous apprécions la qualité constante du produit et l'excellent accompagnement proposé par AnyGenes. »
Dr Élise Lebigot
Biologiste, service de biochimie
Hôpital Bicêtre, AP-HP, Paris-Saclay
Témoignage traduit de l'anglais.
Un kit de détection des mycoplasmes permet de rechercher une contamination par ces bactéries dans des échantillons biologiques. Le kit MycoDiag® d'AnyGenes® utilise la qPCR en temps réel ou la PCR en point final pour détecter l'ADN des organismes ciblés directement dans les surnageants de culture cellulaire.
La contamination par les mycoplasmes peut être détectée par des méthodes reposant sur la PCR, par culture microbiologique ou par d'autres approches adaptées. MycoDiag® permet de rechercher l'ADN des organismes ciblés par qPCR ou PCR en point final, avec des contrôles analytiques contribuant à l'interprétation des résultats.
Oui. La contamination par les mycoplasmes peut modifier l'expression génique, le métabolisme cellulaire et certaines réponses associées à l'inflammation ou à la croissance des cellules. Ces modifications peuvent affecter l'interprétation des résultats d'études de qPCR, de RNA-seq et de biomarqueurs.
MycoDiag® peut fournir des résultats en moins de 2 heures lorsque le test est réalisé dans les conditions expérimentales spécifiées. La durée totale de l'analyse dépend de l'instrument de PCR ou de qPCR utilisé et du protocole expérimental.
Le dépistage doit être réalisé régulièrement, selon les procédures de contrôle qualité du laboratoire et le risque de contamination. Des contrôles supplémentaires sont recommandés lors de l'introduction de nouvelles lignées cellulaires, de la reprise de cultures après décongélation ou avant des expériences importantes.
MycoDiag® cible 25 organismes associés à la contamination des cultures cellulaires, notamment M. hyorhinis, M. orale, M. fermentans, M. arginini, M. hominis, Acholeplasma laidlawii, Spiroplasma et Ureaplasma urealyticum. La liste complète figure dans la section consacrée à la couverture de détection.
Oui. MycoDiag® est proposé dans différentes configurations pour les instruments de qPCR en temps réel compatibles et les applications de PCR en point final. La référence appropriée doit être choisie en consultant les informations de compatibilité MycoDiag® .
Oui. MycoDiag® est destiné aux applications de recherche nécessitant un dépistage régulier de la contamination par les mycoplasmes dans les cultures cellulaires. Il peut être intégré aux procédures de contrôle qualité des laboratoires de biologie moléculaire et de biotechnologie.
Vous souhaitez mettre en place un dépistage régulier des mycoplasmes ou choisir un kit MycoDiag® compatible avec votre instrument de PCR ou de qPCR ? Contactez AnyGenes® pour obtenir un devis, des informations techniques et un accompagnement dans le choix de la configuration adaptée à vos besoins.
