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Réactifs de lyse directe qPCR pour analyse à cellule unique et faible input

Les réactifs DiLysis™ AnyGenes® sont conçus pour soutenir les workflows de lyse directe qPCR, en aidant les chercheurs à préparer des lysats cellulaires pour la RT-qPCR et l’analyse ciblée de l’expression génique, sans extraction conventionnelle d’ARN.

Ce workflow sans extraction est particulièrement utile pour les échantillons à cellule unique, les populations cellulaires rares, le matériel biologique limité ou les expériences à faible input, lorsque les manipulations d’échantillon et les pertes d’ARN doivent être soigneusement contrôlées.

Lyse directe qPCR Workflow sans extraction RT-qPCR cellule unique Échantillons faible input
Réactifs DiLysis AnyGenes pour lyse directe qPCR RT-qPCR cellule unique et analyse d’expression génique faible input

Réactifs DiLysis™ pour lyse directe qPCR : points clés

DiLysis™ soutient la préparation de lysats cellulaires sans extraction d’ARN avant RT-qPCR, afin de simplifier les workflows impliquant des cellules rares, de petites populations cellulaires et l’analyse d’expression génique à faible input.

Workflow sans extraction

Conçu pour lyser directement les cellules et réduire le recours aux étapes conventionnelles d’extraction d’ARN avant analyse RT-qPCR.

Faible nombre de cellules

Peut accompagner des workflows impliquant du matériel biologique limité, y compris des applications autour de 10–100 cellules selon le type d’échantillon et le design expérimental.

Moins de manipulations

Aide à limiter les étapes de manipulation pouvant contribuer aux pertes d’ARN, à la variabilité ou aux contaminations dans les workflows à faible input.

Compatible RT-qPCR

Les lysats cellulaires peuvent être utilisés dans des workflows adaptés de transcription inverse et de qPCR pour l’analyse ciblée de l’expression génique.

Compatible avec SpeAmp®

Peut être combiné avec la préamplification cDNA SpeAmp® lorsque l’abondance des cibles ou la quantité d’échantillon est limitée.

Workflows SignArrays®

Soutient des stratégies qPCR orientées voies de signalisation lorsqu’il est combiné avec une préamplification adaptée et des panels SignArrays®.

Comment la lyse directe qPCR simplifie les workflows cellule unique

L’extraction conventionnelle d’ARN peut être difficile lorsque le matériel de départ est très limité. Les étapes multiples de manipulation peuvent augmenter les pertes d’échantillon, introduire de la variabilité ou compliquer le travail sur cellules rares, populations triées ou petits échantillons biologiques.

DiLysis™ soutient un workflow simplifié de lyse directe qPCR en préparant des lysats cellulaires utilisables pour la transcription inverse et l’analyse qPCR ciblée. Cette approche aide à rationaliser la préparation des échantillons tout en conservant un workflow centré sur des gènes, des voies ou des panels biomarqueurs sélectionnés.

1. Collecte cellulaire

Les cellules sont isolées, triées ou collectées selon la question biologique et le type d’échantillon.

2. Lyse directe avec DiLysis™

Les cellules sont lysées directement avec les réactifs DiLysis™, en réduisant les manipulations avant transcription inverse.

3. Analyse RT-qPCR

Les lysats sont traités par transcription inverse adaptée, préamplification SpeAmp® optionnelle et analyse qPCR ciblée.

Les performances de la lyse directe dépendent du type cellulaire, de la manipulation des échantillons, du niveau d’input, de la stabilité de l’ARN, de l’efficacité de transcription inverse, du design des essais et des conditions qPCR en aval.

Workflow de lyse directe qPCR et données de validation

DiLysis™ soutient les workflows RT-qPCR sans extraction pour les échantillons à faible input et l’analyse ciblée de l’expression génique. Le workflow ci-dessous illustre comment la lyse directe peut être combinée avec la transcription inverse, la préamplification cDNA SpeAmp®, les qPCR SignArrays® et l’analyse des données.

Workflow DiLysis de lyse directe qPCR avec transcription inverse préamplification SpeAmp qPCR SignArrays et analyse des données
Workflow de lyse directe combinant DiLysis™, transcription inverse, préamplification cDNA SpeAmp®, qPCR SignArrays® et analyse des données en aval.

Performance sur faible nombre de cellules

Graphe de validation DiLysis montrant les valeurs Cq selon le log du nombre de cellules
Données de validation sélectionnées montrant une relation linéaire entre les valeurs Cq et le nombre de cellules dans un workflow DiLysis™.
Point de validation : R² = 0,994 dans des expériences sélectionnées à faible nombre de cellules.

Ce que soutient cette validation

Les données de validation sélectionnées soutiennent l’utilisation de DiLysis™ dans des workflows à faible nombre de cellules nécessitant une préparation directe des échantillons avant RT-qPCR.

  • soutient les workflows impliquant du matériel biologique limité ;
  • aide à réduire les manipulations avant transcription inverse ;
  • peut être combiné avec la préamplification SpeAmp® pour la qPCR à faible input ;
  • soutient l’analyse SignArrays® orientée voies de signalisation.
Les performances dépendent du type cellulaire, de la manipulation des échantillons, de la stabilité de l’ARN, de l’efficacité de transcription inverse, du design des essais, de l’abondance des cibles et des conditions qPCR en aval.

Bénéfices clés des réactifs DiLysis™

Les réactifs DiLysis™ sont conçus pour simplifier la préparation des échantillons avant RT-qPCR, en particulier lorsque le matériel cellulaire est limité.

Préparation simplifiée

Réduit les étapes liées à l’extraction avant transcription inverse et analyse qPCR.

Moins de manipulations

Aide à limiter les manipulations manuelles, un point important dans les expériences à faible nombre de cellules.

Adapté aux échantillons rares

Convient aux workflows impliquant des cellules uniques, des cellules rares ou de petites populations cellulaires.

Combiner la lyse directe avec la préamplification qPCR ciblée

Pour les échantillons à très faible input ou les cibles faiblement exprimées, DiLysis™ peut être combiné avec la préamplification cDNA SpeAmp® avant l’analyse qPCR ou SignArrays®.

Lyse directe

DiLysis™ prépare des lysats à partir de matériel cellulaire limité, sans extraction conventionnelle d’ARN.

Préamplification SpeAmp®

SpeAmp® soutient la préamplification ciblée du cDNA lorsque le matériel de départ ou l’abondance des cibles est limité.

Analyse SignArrays®

Les cibles sélectionnées peuvent ensuite être analysées avec des essais qPCR ou des panels SignArrays® orientés voies de signalisation.

Applications des réactifs de lyse directe qPCR

Les réactifs DiLysis™ soutiennent les workflows RT-qPCR à faible input lorsque la quantité d’échantillon, le nombre de cellules ou le temps de préparation peuvent limiter l’extraction conventionnelle d’ARN.

RT-qPCR cellule unique

Soutient l’analyse ciblée de l’expression génique à partir de cellules individuelles ou de très petits groupes cellulaires.

Populations cellulaires rares

Utile pour les cellules triées, les populations enrichies ou le matériel biologique limité.

Expression génique faible input

Aide à préparer les échantillons pour la RT-qPCR ciblée lorsque l’ARN disponible est limité.

Analyse des voies de signalisation

Peut soutenir des workflows orientés voies lorsqu’il est combiné avec SpeAmp® et les panels SignArrays®.

Recherche de biomarqueurs

Soutient l’analyse ciblée de biomarqueurs sélectionnés dans des contextes d’échantillons limités ou rares.

Validation RNA-seq

Peut accompagner le suivi ciblé par qPCR de résultats transcriptomiques sélectionnés lorsque le matériel restant est limité.

Contexte scientifique de la lyse directe et de la RT-qPCR faible input

Les approches de lyse directe et de RT-qPCR à faible input ont été décrites dans la littérature scientifique évaluée par les pairs pour les workflows d’expression génique à cellule unique et à faible quantité d’échantillon. Ces publications illustrent l’intérêt de réduire les manipulations et d’adapter la transcription inverse, la préamplification et les conditions qPCR lorsque le matériel cellulaire est limité.

Lyse cellulaire directe pour le profilage cellule unique

Cette étude décrit la lyse cellulaire directe comme approche pour le profilage de l’expression génique à cellule unique par PCR en temps réel.

Lyse directe pour faibles nombres de cellules

Cet article de Scientific Reports évalue des méthodes de lyse directe optimisées pour les études d’expression génique à faible nombre de cellules.

Bonnes pratiques pour la RT-qPCR cellule unique

Ce tutoriel présente les étapes clés des workflows RT-qPCR cellule unique, incluant collecte cellulaire, lyse, transcription inverse, préamplification, qPCR et analyse des données.

Catalogue des réactifs de lyse directe qPCR

Les réactifs DiLysis™ sont disponibles en différents formats de réaction. Contactez AnyGenes® pour obtenir un devis, des informations produit, les coordonnées de votre distributeur ou un accompagnement technique.

Référence catalogue Nombre de réactions Prix (HT)
DiLysisTM -10
10
***
DiLysisTM -25
25
***
DiLysisTM -50
50
***

Besoin d’aide pour un workflow de lyse directe qPCR ?

AnyGenes® peut vous aider à définir la stratégie de lyse directe, transcription inverse, préamplification et qPCR la plus adaptée à votre type cellulaire, votre niveau d’input, vos gènes cibles et votre analyse en aval.

Que votre projet implique l’analyse à cellule unique, des cellules rares, des échantillons à faible input, le profilage de voies de signalisation ou la validation de biomarqueurs, notre équipe peut vous aider à construire un workflow ciblé.

Questions fréquentes sur la lyse directe qPCR

À quoi servent les réactifs de lyse directe qPCR ?

Les réactifs de lyse directe qPCR servent à lyser directement les cellules avant RT-qPCR, en réduisant ou en supprimant les étapes conventionnelles d’extraction d’ARN dans des workflows adaptés d’expression génique.

Les réactifs DiLysis™ peuvent-ils être utilisés pour la RT-qPCR cellule unique ?

Oui. Les réactifs DiLysis™ peuvent accompagner des workflows RT-qPCR cellule unique et faible nombre de cellules, y compris des applications autour de 10–100 cellules selon le type d’échantillon, l’abondance des cibles et le design expérimental.

Pourquoi utiliser la lyse directe au lieu d’une extraction d’ARN ?

La lyse directe peut simplifier la préparation des échantillons, réduire les étapes de manipulation et aider à limiter les pertes d’ARN, ce qui est particulièrement important lorsque le matériel de départ est rare ou limité.

La lyse directe peut-elle être combinée avec une préamplification qPCR ?

Oui. DiLysis™ peut être combiné avec la préamplification cDNA SpeAmp® lorsque l’input ARN est limité ou lorsque les gènes cibles sélectionnés sont faiblement exprimés.

Les réactifs DiLysis™ sont-ils compatibles avec les SignArrays® ?

DiLysis™ peut être intégré dans des workflows utilisant la préamplification SpeAmp® et les panels qPCR SignArrays® pour l’analyse ciblée de l’expression génique et le profilage de voies de signalisation.

AnyGenes® peut-il aider à optimiser un workflow de lyse directe qPCR ?

Oui. AnyGenes® peut aider à adapter le workflow selon le type cellulaire, le niveau d’input, la stratégie de transcription inverse, les besoins de préamplification, les gènes cibles et les conditions qPCR.

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