-->
La méthylation de l'ADN est une marque épigénétique héréditaire régulée par des ADN méthyltransférases (DNMTs), et qui consiste au transfert d'un groupement méthyl sur la position C5 d'une cytosine. Par le biais de ce processus, la méthylation de l'ADN est impliquée dans une multitude de mécanismes, tels que la régulation de l'expression des gènes, la régulation des éléments transposables, l'empreinte génomique et l'inactivation du chromosome X. Cela explique notamment pourquoi, même si les cellules de l'organisme possèdent la même information génétique, le profil d'expression génique est quant à lui différent d'un type cellulaire à un autre.
Dans les cellules somatiques de mammifères, la méthylation de l'ADN est principalement localisée au niveau des cytosines des ilôts CpG et s'avère essentielle pour de multiples processus biologiques, comme le développement ou la différenciation cellulaire. Un profil d'hypométhylation globale de l'ADN avec des sites d'hyperméthylation localisés (au niveau des promoteurs de gènes suppresseurs de tumeurs notamment) sont fortement associés au cancer. Etudier le statut de méthylation de l'ADN peut ainsi nous aider à comprendre ces mécanismes.
Le pyroséquençage est basé sur le principe de séquençage par synthèse, avec un ajout des nucléotides un par un.
Lors de la réaction, l'addition séquentielle des dNTP est réalisée par cycles. Le pyroséquenceur peut alors suivre en temps réel l'incorporation des nucléotides via la conversion enzymatique du pyrophosphate relargué en un signal lumineux proportionnel et ainsi obtenir la séquence exacte de l'ADN à l'aide de pyrogrammes.
Pour l'analyse de la méthylation de l'ADN, un traitement de l'ADN au bisulfite au préalable permet de transformer toutes les cytosines non méthylées en uraciles, qui deviendront des thymidines après amplification par PCR. Ainsi, pour une position donnée, le pourcentage de cytosines détectées sera représentatif du pourcentage de méthylation de l'ADN.
Tous nos primers individuels sont validés par PCR et qPCR, et les primers de pyroséquençage par pyroséquençage grâce à des critères stricts de contrôle qualité pour vous assurer des résultats de haute qualité.
Appuyé par notre plateforme de bioinformatique et de data mining, AnyGenes® fournit un service complet de pyroséquençage pour vous aider à réaliser vos études de méthylation de l'ADN.
Pour plus d'informations, veuillez nous contacter.